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新型鸭呼肠孤病毒实验室分离溯源与预防治疗

来源:     发布日期:2019/5/8 10:18:37   |    分享    加入收藏   关注:
自2005年以来,在广东、四川、福建、浙江、安徽等省份陆续报道雏番鸭、雏半番鸭、麻鸭群中出现一种新的病毒病,以肝脏和脾脏不规则坏死、出血为主要特征,给当地水禽养殖业造成重大损失,经病毒分离鉴定为新型呼肠孤病毒(NDRV)。2006年首次从北京鸭脾坏死病料中分离到一株NDRV,随后,陆续从番鸭、北京鸭、鹅等水禽中分离到NDRV。NDRV同番鸭呼肠孤病毒(Muscovyduckreovirus,MDRV)均属于正呼肠孤病毒属,但不同于MDRV的是其感染宿主的范围更广,主要以脾出血、坏死为典型症状,且阻碍雏鸭生长,现已成为危害养鸭业重要传染病之一。

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背景

从山东省不同地区发病鸭中收集到6份病料,通过鸭胚分离得到6株病毒,经PCR扩增、克隆测序证实,该病毒是NDRV。病料来自 2017年 12月至 2018年 3月份山东菏泽、临沂、潍坊等地区部分肉种鸭和商品肉鸭养殖场饲养的发病雏鸭。6日胚龄鸭胚由山东省某孵化场提供。

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发病鸭的症状和剖检变化

发病雏鸭出现零星死亡,个体偏小,剖检变化以脾脏坏死为主要特征。发病日龄均在3~15日龄,鸭群早期无明显特异性症状,零星死亡,有的鸭群持续到 30 d,死亡率在 6%~12%左右,后期鸭群体重不均匀。剖检变化以脾脏出血和坏死为主要特征。

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病料的PCR检测结果

6 份脾脏坏死的病料进行 AIV、DHV、GPV、DPV、MDRV、NDRV 扩增显示,6份病料 NDRV检测均为阳性,其他病毒检测均为阴性。鸭胚均在 11~12 日胚龄死亡,死亡胚体水肿,有出血点。

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病毒σC基因的扩增结果

用 RT-PCR分别对 6株分离病毒的核酸进行σC基因扩增,电泳结果显示均得到单一特异性目的条带,片段大小为 997 bp,与目的条带大小相符,阴性对照无条带。

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同源性与进化分析

利用 DNAStar对双向测序结果进行拼接与裁剪,得到6条大小为997 bp的片段,编码区含966个核苷酸,编码 321 个氨基酸。6 株分离病毒间σC基因的核苷酸相似性为 99.0%~100.0%,氨基酸相似性为 99.3%~100.0%,与 GenBank 发布的 NDRV毒株核苷酸相似性为 93.7%~99.3%。将 6株分离病毒的σC基因序列与 GenBank下载的σC基因序列利用 Mega 6.06构建系统进化树,结果显示,所有序列形成两大进化分支,即鸡源支和水禽支,而水禽支又分为经典 MDRV分支和 NDRV支,而所分离的6株病毒均属于NDRV分支。

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讨 论

NDRV 最早发生于我国南方,北方发病较南方少。但近年来,在北京、河北等省份陆续报道NDRV的发生,在 2012年山东地区从绿头野鸭中分离到NDRV,而本研究仅2017年末至2018年初就从山东地区分离到 6株 NDRV,说明 NDRV流行范围从南方到北方不断扩大,且在北方开始流行。NDRV宿主从番鸭、半番鸭和麻鸭适应野鸭、樱桃谷鸭、北京鸭,感染宿主范围越来越广,发病呈逐年增加趋势,且发病日龄愈小或并发感染时其死亡率愈高,给养殖业造成的损失也越来越严重。

同源性分析显示近几年的 NDRV 同源性很高,表明南北流行毒株来源一致。但进化分析显示 NDRV 已经同 MDRV 一样分离于 ARV 成为单独分支,且 NDRV也不同于 MDRV,两者分化为不同亚支。因此,基因的不同导致 NDRV 不同于MDRV,其宿主范围不仅限于番鸭,而是不同种类的水禽。因此,该病毒的基因变异分析和遗传进化分析是 NDRV 的防控关键。有报道称已构建NDRV感染性分子克隆,有助于进一步阐明NDRV的宿主嗜性、病毒复制和发病机制以及由 NDRV引起的免疫学变化。

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 预防和治疗

预防:NDRV的防控势在必行,疫苗研制迫在眉睫。

治疗:安必妥+感克,如果有继发感染细菌,建议添加抗生素协同治疗。

备注:资料引自山东地区新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定_高绪慧等_中国家禽_2018年第 40卷第 20期


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